??????? HPLC 色譜柱是液相色譜的重要組件，因?yàn)樗秦?fù)責(zé)分離基質(zhì)中分析物的色譜柱。保護(hù)和保養(yǎng)色譜柱可確保我們不僅獲得可靠的結(jié)果，還能無(wú)故障操作。我們都知道 HPLC 色譜柱的使用壽命是有限的，但是如何確保獲得最長(zhǎng)的使用壽命呢？
要回答這個(gè)問(wèn)題，讓我們首先看看色譜柱可能被阻塞的原因。
??????? 一、引入 HPLC 色譜柱的樣品通常多種多樣且復(fù)雜
??????? 樣品含有許多可能與 HPLC 方法條件不兼容的成分。在沒(méi)有適當(dāng)?shù)臉悠分苽?預(yù)處理的情況下注入此類(lèi)樣品可能會(huì)導(dǎo)致色譜柱堵塞。在反相分離過(guò)程中，殘留的蛋白質(zhì)和高疏水性化合物（如脂質(zhì)）也可能不會(huì)完全洗脫出來(lái)，它們往往會(huì)慢慢吸附到色譜柱上并引起問(wèn)題。
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??????? 二、不兼容的樣品稀釋劑和流動(dòng)相
??????? 如果樣品稀釋劑與流動(dòng)相不相容，那么當(dāng)將樣品引入流動(dòng)相時(shí)，樣品可能會(huì)沉淀。如果稀釋劑與流動(dòng)相相比極性太強(qiáng)或非極性，這通常會(huì)出現(xiàn)。
???????? 流動(dòng)相緩沖液：緩沖液通常用作 HPLC 中的流動(dòng)相。重要的是在使用前過(guò)濾這些緩沖鹽。有時(shí)，由于實(shí)驗(yàn)室溫度的不同，一些緩沖液成分容易沉淀。使用過(guò)高濃度的緩沖液也會(huì)導(dǎo)致沉淀。
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??????? 三、來(lái)自磨損的泵密封件的顆粒物
??????? 泵密封件和噴油器轉(zhuǎn)子密封件通常由橡膠材料制成。由于正常磨損，這些組件往往會(huì)在溶劑管路中產(chǎn)生一些碎屑。如果不對(duì)泵和進(jìn)樣口進(jìn)行定期維護(hù)，碎屑往往會(huì)到達(dá)色譜柱篩板并堵塞色譜柱。
??????? 四、現(xiàn)在我們知道了可能導(dǎo)致阻塞的原因。我們?nèi)绾伪Ｗo(hù)它？
?????? 為了保護(hù) HPLC 色譜柱（分析型和制備型）免受污染，例如進(jìn)樣中的微粒、未過(guò)濾的流動(dòng)相組分或進(jìn)樣器磨損的泵密封/轉(zhuǎn)子密封的碎片，建議使用恒譜生液相色譜保護(hù)柱。
???????? 五、什么是保護(hù)柱？
??????? 保護(hù)柱本質(zhì)上是一個(gè)微型柱，理想情況下填充與分析柱相同的填料，并連接在分析柱之前。保護(hù)柱中的篩板與分析柱中的篩板類(lèi)似。這意味著任何可能阻塞分析柱的東西都會(huì)被保護(hù)柱阻塞。然后可以通過(guò)簡(jiǎn)單地更換色譜保護(hù)柱來(lái)移除污染物，從而保護(hù)分析柱的使用壽命。
??????? 為了了解保護(hù)柱對(duì)色譜柱壽命的作用，我們采取了實(shí)驗(yàn)。對(duì)于未受保護(hù)的色譜柱連續(xù)進(jìn)樣基質(zhì)會(huì)導(dǎo)致反壓穩(wěn)定且不可逆地增加。如果沒(méi)有恒譜生液相色譜保護(hù)柱保護(hù)，反壓會(huì)呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。這種背壓的增加最終會(huì)導(dǎo)致色譜退化，包括譜帶展寬和可能的峰分裂。因此，方法靈敏度、定量和峰識(shí)別也可能受到不利影響。
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??????? 使用恒譜生HPLC液相色譜耗材直連（聯(lián)）分析保護(hù)柱，大大延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命。在這種情況下，基質(zhì)的連續(xù)進(jìn)樣仍會(huì)導(dǎo)致壓力升高，但這是由于顆粒物被捕獲在 保護(hù)柱本身中，而不是在 UHPLC/HPLC 色譜柱中。因此，只需定期更換直聯(lián)保護(hù)柱，反壓即可恢復(fù)到起始水平，有效色譜柱壽命大大延長(zhǎng)。
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??????? 六、購(gòu)買(mǎi)保護(hù)柱時(shí)我應(yīng)該尋找哪些功能？
??????? 保護(hù)柱的填充材料（固定相）應(yīng)與分析柱的填充材料相同，這樣選擇性不會(huì)發(fā)生變化。保護(hù)柱的 ID 應(yīng)與分析柱的 ID 相同或小于分析柱的 ID，以盡量減少增加的譜帶展寬。始終使用 ID 最接近色譜柱 ID 的防護(hù)裝置。保護(hù)柱的長(zhǎng)度應(yīng)盡可能短以避免額外的死體積。
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發(fā)布于: 2022-04-15